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人細胞8305C（干細胞庫保藏）說明書冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人細胞8305C（干細胞庫保藏）說明書
種屬:8305C

類型:甲狀腺

形態(tài):上皮細胞

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:人細胞8305C完全培養(yǎng)液配方（100 ml）： EMEM (Invitrogen, 11090081) 88 ml Glutamin(Invitrogen, 25030081) 1 ml Non-essential Amino Acids, 100× (Invitrogen, 11140) 1 ml FBS (Gibco) 10 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人細胞8305C（干細胞庫保藏）說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人細胞;Hela S3 [HeLaS3] 大鼠大隱平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL5-乙酰水楊酸5-Acetylsalicylic acid質(zhì)量規(guī)格：美國進口

AtT20 小鼠細胞N-芐基甘氨酸N-Benzylglycine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%,BR

VSIG4 Others Human 人 VSIG4 人細胞裂解液 (陽性對照) 扎那米韋Zanamivir質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,一水物

人癌細胞;MDA-MB-435S扎那米韋(標準品)Zanamivir質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98.0%,標準品

IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細胞裂解液 (陽性對照) 去氧氟尿苷/5'-脫氧-5-氟尿嘧啶核苷Doxifluridine/5-Fluoro-5′-deoxyuridine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
平滑肌細胞生長添加物-無血清SMCGS-sf滅草?。藴势罚┵|(zhì)量規(guī)格：分析標準品Monuron

TE 353.Sk細胞，人正常皮膚細胞 人胚腎上皮包裝細胞,GP2-293細胞 原代滑膜皮細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml煙嘧磺?。藴势罚┵|(zhì)量規(guī)格：分析標準品Nicosulfuron

山羊腎上皮樣細胞;DG-K1鈮標準溶液(1000μg/ml)質(zhì)量規(guī)格：1000μg/mlNiobium standard

REN Others Human 人 RENIN 人細胞裂解液 (陽性對照) 鎳標準溶液(100μg/mL，基體:1%HNO3)質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL，基體:1%HNO3Nickel Standard

CM-M125小鼠牙細胞完全培養(yǎng)基100mL鉀標準溶液(500mg/L,溶劑：水)質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：水Potassium standard
Hut-78細胞，皮膚T細胞瘤 人平滑肌,T/G細胞 人低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細胞;OCM-1ASulfo NHS;N-羥基硫代琥珀質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRsulfo-NHS

A9(小鼠皮下結(jié)締組織細胞) 5×106cells/瓶×2亞甲蘭,亞甲基藍質(zhì)量規(guī)格：BSMethylene Blue

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸沃尼妙林質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRValnemulin HCl

水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S51酸泰樂菌素質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRTylosin phosphate

DKKL1 Others Human 人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 白鮮堿(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品Dictamnine
人細胞8305C（干細胞庫保藏）說明書96-C細胞，低轉(zhuǎn)移細胞 人細胞,PC-3細胞 人膀胱基質(zhì)成纖維細胞總RNAHBdSF NA替卡格雷Ticagrelor質(zhì)量規(guī)格：>99%,II晶型

非洲綠猴腎細胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7替卡格雷(標準品)Ticagrelor質(zhì)量規(guī)格：>99%,光學(xué)度>97%,標準品

AHSG Others Mouse 小鼠 Fetuin-A / AHSG 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸雷莫司瓊Ramosetron HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠網(wǎng)織細胞;M5076鹽酸司維拉姆Sevelamer HCl質(zhì)量規(guī)格：BR

IL5 Others Canine 狗 IL5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 碳酸司維拉姆Sevelamer carbonate質(zhì)量規(guī)格：BR;Binding of  Phosphate 4.0~7.0mmo1/g
收到人細胞8305C（干細胞庫保藏）說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。