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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
永生化食管上皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱(chēng)　永生化食管上皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
種屬:SHEE

類(lèi)型:貼壁生長(zhǎng)

形態(tài):上皮細(xì)胞

分離基物:食管；上皮細(xì)胞

提供形式:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管

安全等級(jí):2

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM（含4mM L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉）+10%FBS

傳代方法:1:3~1:6傳代；2~3天換液1次。

生長(zhǎng)條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

存儲(chǔ)條件:90%FBS+10%DMSO 液氮

細(xì)胞分類(lèi)：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶(hù)。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶(hù)，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到永生化食管上皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是永生化食管上皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：
CL-0206SGC7901(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2草酸銨(98~101%,BR)Ammonium oxalate hydrate質(zhì)量規(guī)格：98~101%,BR

MLF, 小鼠成纖維細(xì)胞5'-單1酸腺苷(>95%，BR)Adenosine-5'-monophosphate, free acid質(zhì)量規(guī)格：>95%，BR

Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株;293sars181A 人膀胱上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL硫酸鋁十六水(>Aluminum sulfate, hexadecahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人急性早幼粒細(xì)胞;HL-60葡萄糖-6-1酸脫氫酶，硫酸銨懸浮液Glucose-6-phosphate dehydrogenase質(zhì)量規(guī)格：酶活>200 NADP units/mg，BC

PPP3R1 Others Human 人 PPP3R1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 蘋(píng)果酸脫氫酶(>12,000U/ml，BC)Malate dehydrogenase質(zhì)量規(guī)格：>12,000U/ml，BC
小鼠氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL鹽酸丙美卡因質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRProparacaine HCl

EJ人細(xì)胞 Human bladder cancer cell line EJ 1640+10% FBSN-芐氧羰基-L-絲氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRZ-Ser-OH

IL36B Protein Mouse 重組小鼠 IL1F8 / IL36b 蛋白N-芐氧羰基-L-蘇氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.98Z-Thr-OH

NCI-H23(人非小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 THP-1(單核細(xì)胞)N-芐基甘氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98.0%,BRN-Benzylglycine

CL-0383MDA-MB-436(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2扎那米韋質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,一水物Zanamivir
SUP-B15人Ph+急淋細(xì)胞系 SUP-B15 acute lymphoblastic leukemia cell line Ph+ IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS二苯基砜-4,4'-二氯-3,3'-二磺酸二鈉(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)Di Diphenylsulfone-4,4'-dichloro-3,3'-disulfonate

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子雙酚 C(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane

293FT(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)4,4'-異亞丙基二苯氧基乙酸(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)4,4'-Isopropylidenediphenoxyacetic Acid

人*成纖維細(xì)胞cDNAHCF cDNA四溴雙酚A(>98.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)Tetrabromobisphenol A

IL1RL1 Others Human 人 IL1RL1 / ST2 ( isoform A ) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2-乙酰氨基-2-脫氧-D-半乳糖醛酸質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口2-Acetamido-2-deoxy-D-galacturonic Acid
永生化食管上皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)Ski細(xì)胞，人宮頸上皮細(xì)胞癌 人急性細(xì)胞T細(xì)胞,CCRF-CEM細(xì)胞 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞;IEC-6乙酸二丙基銨(約0.5mol/L的水溶液)[離子對(duì)色譜級(jí)]IPC-DPAA (ca.  0.5mol/L in Water)質(zhì)量規(guī)格：用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對(duì)試劑

BNL CL.2(小鼠胚胎肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2乙酸二戊基銨(約0.5mol/L水溶液)[離子對(duì)色譜級(jí)]IPC-DAAA (ca.  0.5mol/L in Water)質(zhì)量規(guī)格：用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對(duì)試劑

CPB1 Others Human 人 CPB1 / PCPB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 乙酸二己基銨(約0.5mol/L的水溶液)[離子對(duì)色譜級(jí)]IPC-DHAA (ca.  0.5mol/L in Water)質(zhì)量規(guī)格：用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對(duì)試劑

中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞;V791-辛烷磺酸鈉[離子對(duì)色譜級(jí)]IPC-ALKS-8質(zhì)量規(guī)格：離子對(duì)色譜用試劑

CALU Others Human 人 CALU / Calumenin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1-壬烷磺酸鈉[離子對(duì)色譜級(jí)]IPC-ALKS-9質(zhì)量規(guī)格：離子對(duì)色譜用試劑