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細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
豬小腸上皮細(xì)胞 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　豬小腸上皮細(xì)胞
種屬:IPEC-J2

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%Hyclone DMEM 高糖 培養(yǎng)基；10% Gibco 胎牛 血清、1%-1.5%Cellbio 雙 抗

傳代方法:1：2 或 1：3 傳代

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到豬小腸上皮細(xì)胞 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。
以下是豬小腸上皮細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞柴胡皂苷B2（標(biāo)準(zhǔn)品）Saikosaponin B2質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人胚胎，皮膚，肌肉;M-22 人食管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL柴胡皂苷C（標(biāo)準(zhǔn)品）Saikosaponin C質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人間充質(zhì)干細(xì)胞(脂肪)cDNAHMSC-ad cDNA柴胡皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)Saikosaponian D質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

TNFSF11 Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 常春藤皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)Hederagenin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A常春藤皂苷元Hederagenin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,BR
小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte蟛蜞菊內(nèi)脂;蟛蜞菊內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Wedelolactone

TNFRSF9 Others Canine 狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甜橙黃酮質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Sinensetin

CM-M005小鼠氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL白屈菜堿(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Chelidonine

KYSE 450細(xì)胞，人食管鱗癌 神經(jīng)細(xì)胞,CRT細(xì)胞 家兔腎細(xì)胞;RABK3葫蘆素D;葫蘆苦素D質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Cucurbitacin D

CCL-149(大鼠肺泡上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2甲硝唑雜質(zhì)A（2-甲基-5-硝基咪唑）標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量規(guī)格：檢查2-Methyl-5-nitroimidazole
人破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL品紅，英文名或英文縮寫：Fuchsin basic，級別：生物技術(shù)級，65%，柑橘來源，規(guī)格：250毫克

PA317細(xì)胞，小鼠胚成纖維包裝細(xì)胞 6T-CEM(T細(xì)胞) 大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-11 Bornqol 207-70-0

EFNB1 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標(biāo)簽)TMB游離酸溶液，英文名或英文縮寫：3,3,5,5-Tetrametxyl benzidine solution liquid-1 component，級別：BR，98%，規(guī)格：5克

A-427(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠T細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9ORANGEGwo7iumSALT橙黃G 鈉*100G1936-15-8RT

人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHPAEC NA(N-乙酰-D-基葡萄糖)
豬小腸上皮細(xì)胞 BHK-21(倉鼠腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2異丁司特Ibudilast質(zhì)量規(guī)格：>98%

CTSA Others Human 人 Cathepsin-A / CTSA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 異丁司特(標(biāo)準(zhǔn)品)Ibudilast質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO Hu 164 SCF 17吉西他濱Gemcitabine質(zhì)量規(guī)格：>98%,free base

ALDH4A1 Others Human 人 ALDH4A1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 沙利度胺（反應(yīng)停）Thalidomide 質(zhì)量規(guī)格：>98%

CL-0065CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株)5×106cells/瓶×2沙利度胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Thalidomide 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品